NEFA Assay Kit is een hulpmiddel voor de kwantificering van NEFA

NEFA-testkit is een hulpmiddel voor de kwantificering van NEFA (stikstofmonoxide). Het wordt gebruikt om de concentratie NEFA in bloed- of weefselmonsters te bepalen. NEFA is een essentiële voedingsstof die verantwoordelijk is voor de regulatie van het energiemetabolisme, de prikkelbaarheid van het hart, de neuromusculaire geleiding, de bloeddruk en de bloedstolling. Het wordt voornamelijk aangetroffen in botten, spieren, zachte weefsels en rode bloedcellen.

Voorbereiding

NEFA is een klein eiwit van 50,2 kDa dat het vermogen heeft om aan DNA te binden. Het is een cytosolisch type I vetzuursynthase (FAS)-complex dat niet-veresterd palmitinezuur produceert. In aanwezigheid van Acyl-CoA-oxidase (ACS) oxideert het FAS-complex 3-methyl-N-ethyl-N-(b-hydroxyethyl)-aniline tot 4-aminoantipyrine, de moleculaire voorloper van acetyl-CoA. Dit proces is een cruciaal enzymatisch proces voor alle eukaryotische organismen.

Hoewel NEFA misschien niet de enorme massa van vet heeft, is het een belangrijke brandstofbron voor perifere weefsels. Het wordt door de lever gemetaboliseerd en in complexvorm met albumine naar perifere weefsels getransporteerd. NEFA wordt ook vrijgegeven door een thioesterase (TE) domein van het FAS-complex.

Pipetteren

ELISA-kits worden gebruikt om kleine chemische verbindingen, eiwitten en peptiden te detecteren. Deze kits zijn gebaseerd op recombinante eiwitten die tot expressie worden gebracht in E.coli. De kits bevatten geen azide, thimerosal en andere natuurlijke hulpbronnen.

In de kit zitten reagentia zoals BSA, pyrogeenvrije verdunningsbuffer en wasoplossing. De wasoplossing is twee weken stabiel bij 2-8°C. De verdunningsbuffer bevat 0,9% fysiologische zoutoplossing.

De kit heeft een interne NEFA-standaard. Hieraan wordt NEFA toegevoegd in een concentratie die overeenkomt met de verwachte concentratie in het monster. De absorptie van het blauwpaarse pigment bij 546 nm wordt gemeten om de concentratie NEFA in het monster te berekenen.

Colorimetrisch

Het gebruik van de WAKO NEFA-kit heeft een verscheidenheid aan resultaten opgeleverd, waaronder enkele die onzinnig zijn. Niettemin is de NEFA-kit een waardige kandidaat als het gaat om het bepalen van het relatieve vetzuurgehalte van dierlijke weefselmonsters. Als zodanig is de NEFA-kit een van de meer populaire laboratoriumtests. De kit wordt geleverd met instructies voor het testen van verschillende soorten monsters, waaronder bloed, serum, speeksel en een verscheidenheid aan lipiden.

Het meest opwindende deel van de kit is dat deze kan worden gebruikt om een ​​verscheidenheid aan vetzuren te meten, inclusief de vetzuren die vaak in lipiden worden aangetroffen. De kit wordt geleverd met een reeks enzymen die zijn ontworpen om een ​​verscheidenheid aan vetzuren te detecteren, waaronder de C-8- en C-16-vetzuren die bij mensen en dieren voorkomen. Niettemin wordt de kit niet aanbevolen voor gebruik in FFA-concentraties met hoge precisie over een breed bereik.

Elektrochemisch

NEFA's zijn belangrijke vetzuren voor de menselijke gezondheid, maar worden zelden beoordeeld. Bovendien is de detectie ervan erg duur. Daarom kan het monitoren van veranderingen in hun concentraties helpen bij een nauwkeurigere ziektepreventie en -beheer. In deze studie werd een elektrochemische testkit voor NEFA ontwikkeld, waarbij PDA-MWCNT als sensoroppervlak werd gebruikt. Deze elektrode vertoonde een goede elektrokatalytische activiteit voor NEFA-oxidatiestappen en kon in praktijktoepassingen worden gebruikt.

De enzymelektrode bestond uit een meerlaagse composietfilm van PDA-MWCNT en ACOD, ACS en polymeer. De volgorde van de lagen werd gekozen om overeen te komen met de enzymatische reactievolgorde. Er werd vastgesteld dat de ACS en ACOD biologisch actief bleven in de film.

NEFA-concentratie in T2D

NEFA-concentraties in het bloed zijn onderzocht in de context van obesitas en hypertensie. Van deze verbindingen is aangetoond dat ze de bloeddruk verhogen via al-adrenerge stimulatie en de stress door oxidanten verhogen. NEFA's worden ook geassocieerd met het metabool syndroom. Deze verbindingen kunnen belangrijk zijn bij de ontwikkeling van hypertensie.

Er zijn verschillende modellen voorgesteld om de plasma-NEFA-respons op een intraveneuze glucoseprovocatie te beschrijven. Het Boston-model gaf nauwkeurig de vierde fase van de toename van de NEFA-concentratie weer. Het model beschrijft echter niet de initiële latentiefase. Het Fabian-model gebruikte een eenvoudige exponentiële helling om deze fase te beschrijven. Op dezelfde manier kon het Thomaseth-model de rebound-fase niet beschrijven.

NEFA-niveaus in triglyceriden

Verschillende onderzoeken hebben de effecten van bariatrische chirurgie op de samenstelling van plasma-NEFA onderzocht. In een meta-analyse die in 2016 werd gepubliceerd, waren de serum-NEFA-waarden zes en twaalf maanden na de operatie verlaagd. Dit kan te wijten zijn aan een verlaagd insulineniveau. In een ander onderzoek werden plasma-NEFA's gemeten bij een groep zwaarlijvige patiënten voor en na een Roux-en-Y maag-bypassoperatie.

De concentraties van zeven NEFA's waren negen maanden na de operatie verlaagd. Linoleaat (een omega-6-vetzuur) werd verminderd met 18:2, stearaat met 18:0 en oleaat met 16:0. De concentratie docosahexaenoaat werd echter niet beïnvloed. NEFA's werden omgezet in vetzuurmethylesters (FAME's). Deze werden vervolgens geanalyseerd met gaschromatografie-massaspectrometrie (GC-MS).