Een kort overzicht van de alkalische fosfatase-assaykit (Alp)

Een belangrijk onderdeel van elk goed laboratorium zijn de verschillende soorten gereedschappen en producten voor monstervoorbereiding. De meest voorkomende soorten monstervoorbereidingsinstrumenten zijn bouillonmixers, silica-elektroforese/röntgenstraling diffuus, glaswerk op zuur gebaseerde kweekschalen en microplaten, putjes en kweektrommels. Al deze producten maken de analyse en evaluatie van monsters van vrijwel alle soorten mogelijk. Dit soort producten zijn echter ontworpen voor een specifiek gebruik, waardoor het moeilijk is om de bruikbaarheid van de verschillende producten voor verschillende doeleinden te generaliseren. Dit is waar een betrouwbare in-vitrokit voor alkalische fosfatase in menselijk serum van pas komt.

Een betrouwbare in vitro kit voor alkalische fosfatase in menselijk serum kan worden gebruikt om de zuurasretentie, colorimetrie en vrijgevigheid van een monster te bepalen. Zodra monsters met kweekmedium worden gemengd, ondergaan ze verschillende processen. Eerst wordt het kweekmedium gemengd met monsterbuffer. Door deze combinatie kunnen de monsters meerdere variabelen ervaren, waarvan de buffer een cruciaal onderdeel is. Hierdoor kunnen wetenschappers op verschillende tijdstippen de concentraties van verschillende elementen op de monsters evalueren.

Een belangrijk onderdeel van de buffer is de pH-indicator. Deze detecteert de zuurgraad van het monster om de concentratie van het substraat te bepalen. Vervolgens is de volgende stap het spoelen van de monsters om eventuele oppervlakteresiduen zoals eiwit of DNA te verwijderen. Vervolgens worden de monsters geïncubeerd met variërende hoeveelheden alfahydroxyaceton en vervolgens in een in alkalisch fosfaat opgelost kweekmedium geplaatst dat een verscheidenheid aan verschillende biologische probes bevat waaraan alkalische fosfatase is toegevoegd.

De kit bevat een spoelborstel en een micropropulsiepomp. De kit gebruikt microkristallijne gist als groeimedium. Monsters kunnen worden gekweekt in een petrischaal gevuld met water of op magnetische platen waar het monster wordt gespoeld met gedestilleerd water. Bevroren menselijk serum of bevroren dierenserum kan ook worden gebruikt ter vervanging van de kweekmedia in een in alkalische fosfaat opgeloste enzymkit voor het in vitro meten van alpactiviteit.

Er zijn verschillende voordelen aan het gebruik van dit type kit. Ten eerste is deze methode gevoelig voor veranderingen in de substraatconcentratie en kan dus eventuele veranderingen in de substraatniveaus detecteren zolang het monster in suspensie blijft. Hierdoor kunnen onderzoekers metingen verrichten aan de alpkinetiek, substraatoxidatie en andere biochemische processen. Ook kunnen de serummonsters en het kweekmedium dat bij de enzymtest wordt gebruikt, indien nodig worden vervangen.

De laboratoriumreagentia in de kit bevatten standaardcurvereagentia en pH-indicatoren. Er is ook een starterspakket op maat verkrijgbaar. De op maat gemaakte starterkit bevat menselijke plasmamonsters van vier verschillende personen. De bloeddruk, hartslag en temperatuur worden per persoon gemeten als onderdeel van de standaardcurveanalyse.

De pH-indicator in de kit is een digitale sonde die kan worden gebruikt om de zuurgraad of alkaliteit van menselijk serum of bevroren monsters te bepalen. De pH-indicator en de microkristallijne gistsuspensie worden gecombineerd met de testreagentia. Na het mengen van de drie componenten worden de monsters twee uur bij 37°C geïncubeerd. De monsters worden vervolgens op een lineair bereik van concentraties van de standaardcurve-reagentia getest om de monsterdichtheid en concentratie van het alkalische fosfaatamine te bepalen. De microkristallijne gist wordt vervolgens getest op een lineair bereik van concentraties van het substraatamine in de alkalische fosfaatamineconcentratietesten om de substraatconcentratie en dichtheid van het alkalische fosfaatamine in de monsters te bepalen.

De kit bevat een instructiehandleiding met volledige instructies over het gebruik van de kit en de procedure voor het berekenen van de reagentia die nodig zijn voor gebruik in de tests. De kit kan worden gebruikt voor enkele of meerdere assays. De gebruikte reagentia zijn op latexbasis en zullen niet nadelig reageren op medicijnen die oraal worden ingenomen. Het is mogelijk om 10-250 u alpen in monsters te detecteren. Voor meer informatie over de testprocedures en de monsternameprocedures zijn de websites van de fabrikanten op aanvraag beschikbaar.